您好!歡迎訪問山東高芯生物傳感器研究院有限公司
                        專注提供 醫療器械與科學器材服務
                        專注于為 提供科學器材一站式采購服務的生產廠家
                        186-6013-5028
                        0571-28994422
                        您當前的位置: 主頁 > 新聞動態 > 行業動態 >

                        行業動態

                        核酸提取之——柱提法

                        更新時間??2022-03 閱讀 255

                        今天我們就來介紹核酸(DNA/RNA) 提取"柱提取"中最常用、最經典的提取方法之一,也就是-旋轉離心柱提取方法。




                        核酸分為DNA和RNA。是PCR決心將其從臨床標本中去除提取的前提。其實DNA和RNA 提取的基本思路是一樣的,只是由于對樣本的敏感性和處理中影響因素的差異,在具體的提取步驟或注意事項上還是有一些區別。




                        我們從復雜的臨床標本中純化了核酸 提取


                        ①去除PCR抑制劑;


                        ②增加目標物核酸的濃度,達到PCR的具體測定范圍:


                        ③提高樣品的均勻性,保證測定的精密度和重復性。


                        PCR detection 核酸的理想樣品制備方法應能滿足上述三個要求。事實上,很多核提取方法都很繁瑣、費時,或者很貴,或者提取樣本達不到臨床檢測要求。


                        目前我們國內臨床PCR 實驗室。核酸 提取基本上是手動操作,這也是問題最多的環節。核酸 提取的方法有很多,但大致可以分為四類:


                        1.生化方法;


                        2.免疫學方法


                        3.物理方法;


                        4.生理方法。




                        接下來我們進入主題——旋轉離心柱提取






                        旋轉柱技術是一種從生物樣品中分離純化痕量核酸的簡單方法,屬于硅吸附法的一種。是歐美科學家從80年代后期開始研發的一種微量快速核酸分離純化方法??朔藗鹘y核酸純化方法繁瑣費時的缺點,更適用于涉及核酸需要大量微量核酸分離純化的現代科學研究和臨床檢測工作。




                        它可以簡單地分為三個部分:




                        第一部分是用裂解液破碎細胞,釋放核酸 in細胞;


                        在第二部分中,釋放的核酸被特定地吸附在特定的硅載體上。當然,這種載體只對核酸有很強的親和力和吸附作用,但對蛋白質、多糖、脂類等其他生化成分既無親和力也無吸附作用。


                        第三部分是洗脫核酸吸附在特定載體上,從而得到純化的核酸。




                        每個商業套件的提取步驟大致相同:




                        臨床標本的預處理


                        |


                        加入蛋白酶K緩沖液、樣本和裂解物,并充分混合。


                        |


                        加入乙醇(無水乙醇更好)沉淀核酸


                        |


                        轉移樣本(將樣本從EP管轉移到離心柱)


                        |


                        洗滌(核酸吸附在硅柱上,洗去混合溶液中的雜質)


                        |


                        洗脫核酸(TE緩沖液:Tris-HCl,EDTA,PH7.5~8.0)




                        硅膠柱核酸載體上的膜為人工膜,具有保存方便、重復可靠、穩定的特點。



                        博科全自動核酸提取儀




                        我做實驗 提取 核酸,也是用這個方法,簡單快捷方便。


                        還有其他的核酸 提取方法,如:磁珠法、沸騰裂解法、玻璃粉吸附法、硅膠吸附法等。